Содержание ретинола пальмитата в крови резко возрастает через 2 часа после накожного нанесения мази Радевит® и возвращается к исходной концентрации через 72 часа. Отмечается некоторое увеличение содержания a-токоферола ацетата через 6 ч после начала эксперимента. Содержание 25-оксивитамина D не изменяется на протяжении всего эксперимента.

Целью данной работы являлось:

  1. изучение динамики поступления ретинола пальмитата, a-токоферола ацетата и эргокальциферола из мази Радевит® в кровь экспериментальных животных после нанесения ее на кожу;
  2. расчет основных фармакокинетических параметров витаминов;
  3. на основе полученных данных дача рекомендаций по применению этого препарата.

Опыты были поставлены на беспородных белых крысах (самки и самцы) массой 200-250 г. В первой серии у животных за 24 ч до начало эксперимента на участке кожи спины размером 3х3 см удалялся волосяной покров. На оголенный участок кожи наносили 0,5 г мази Радевит®. Во второй серии масляные растворы ретинола пальмитата и a-токоферола ацетата вводили перорально с помощью зонда в эквивалентных концентрациях. Через 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 24 и 48 ч после аппликации мази или введения масляных растворов витаминов животных декапитировали под легким эфирным наркозом. В сыворотке крови с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии определяли содержание ретинола пальмитата, a-токоферола ацетата и 25-оксивитамина D. Контролем служили интактные животные.

Методика определения ретинола пальмитата. 0,1 мл сыворотки крови смешивали с 0,3 мл этилового спирта и встряхивали на Vortex Mix в течение 1 мин. Затем добавляли 0,7 мл н-гексана, встряхивали на Vortex Mix в течение 5 мин и центрифугировали 5 мин при 1000 об/мин. Органическую фазу отбирали, переносили в конические флаконы, упаривали досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяли в 50 мкл смеси н-гексанизопропиловый спирт (99,5:0,5) и полностью вводили в хроматограф. Использовали колонку Ultrаspherе-Si, 5 мкм (4,6х250 мм). Элюирующая система - н-гексанизопропиловый спирт, (99,5:0,5), скорость потока - 1 мл/мин. Детектирование осуществляли при 325 нм, чувствительность 0,010 АЕ полной шкалы.

Методика определения a-токоферола ацетата. 0,1 мл сыворотки крови смешивали с 0,3 мл этилового спирта и тщательно перемешивали в течение 5 мин на Vortex Mix. Затем добавляли 0,7 мл н-гексана, перемешивали в течение 5 мин на Vortex Mix и центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин. Органическую фазу отбирали, переносили в конические флаконы и упаривали досуха в токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяли в 50 мкл метилового спирта и полностью вводили в хроматограф. Использовали колонку Ultrasphere-ОDS, 5 мкм (4,6х250 мм). Элюирующая система - метанол (100%), скорость потока - 1 мл/мин. Детектирование осуществляли при 292 нм, чувствительность 0,010 АЕ полной шкалы.

Методика определения 25-оксивитамина D. 1 мл сыворотки крови смешивали с 3 мл этилового спирта и встряхивали на Vortex Mix в течение 1 мин. Затем добавляли 7 мл н-гексана, встряхивали на Vortex Mix в течение 5 мин и центрифугировали 5 мин при 1000 об/мин. Органическую фазу отбирали, а водную фазу повторно экстрагировали 5 мл н-гексана. Органические фазы объединяли и упаривали досуха в токе азота при комнатной температуре, остаток растворяли в 100 мкл смеси н-гексанизо-пропиловый спирт (80:20). Предварительную хроматографическую очистку экстракта осуществляли на колонке (4,6х250 мм), заполненной силикагелем 25-40 мкм. Элюирующая система н-гексан-изопропиловый спирт (80:20). Фракцию, содержащую 25-оксивитамин D, собирали в конические флаконы, упаривали досуха в токе азота, остаток растворяли в 50 мкл смеси метанол - вода (91:9) и полностью вводили в хроматограф. Использовали колонку Ultrаspherе-ODS, 5 мкм (4,6х250 мм), элюирующая система - метанол-вода (91:9), скорость потока - 1 мл/мин. Детектирование осуществляли при 265 нм, чувствительность 0,010 АЕ полной шкалы.

Результаты

Достоверное увеличение содержания ретинола пальмитата в крови крыс после нанесения мази на кожу наблюдается уже через 0,5 ч (таблица 1).

Таблица 1. Концентрация ретинола пальмитата (мкг/100 мл), a-токоферола ацетата (мкг/100 мл) и 25-(ОН)D (нг/мл) в сыворотке крови крыс после однократной аппликации на кожу мази Радевит® (М ± m, n=8)
Время взятия крови Концентрация
(часы) ретинола пальмитата a-токоферола ацетата 25-оксивитамина D
Интактные 39,6 ± 0,3 3,64 ± 0,5 14,60 ± 1,0
0,5 102 ± 21 2,57 ± 0,7 10,90 ± 1,6
1 1125 ± 95 3,57 ± 0,7 7,25 ± 0,6
2 1145 ± 74 3,60 ± 0,5 7,50 ± 1,4
6 460 ± 38 4,90 ± 0,8 7,70 ± 1,1
24 427 ± 35 4,10 ± 0,7 7,80 ± 0,6
48 64 ± 3 3,40 ± 0,4 9,10 ± 1,6

К первому часу концентрация ретинола пальмитата возрастает до максимального значения, равного 1125 мкг/100 мл крови и сохраняется на том же уровне на протяжении 2 ч. Далее к 6 ч отмечается снижение концентрации ретинола пальмитата до 460 мкг/100 мл крови. К 24 ч содержание этого вещества в сыворотке соответствует 427 мкг/100 мл крови, а через 48 ч - 64 мкг/100 мл крови. Наблюдаемые изменения имеют статистически значимый характер.

После однократного нанесения мази уровень a-токоферола ацетата в сыворотке проявляет тенденцию к увеличению (незначительно выраженную и недостоверную) к 6 ч и в дальнейшем снижается, достигая к 48 часам исходного значения.

Концентрация 25-оксивитамина D на протяжении всего эксперимента также не имела достоверных различий. Полученный результат позволяет предположить, что при использовании мази данного состава эргокальциферол поступает в кровь в незначительных количествах и, следовательно, не должен оказывать токсического действия на организм.

Содержание ретинола пальмитата и a-токоферола в крови крыс в различные интервалы времени после перорального их введения в виде масляных растворов представлено в таблице 2.

Таблица 2. Концентрация ретинола пальмитата (мкг/100 мл) и a-токоферола ацетата (мкг/100 мл) в сыворотке крови крыс после введения масляных растворов per os (M ± m, n = 6)
Время взятия крови Концентрация
(часы) ретинола пальмитата a-токоферола ацетата
Интактные 52,1 ± 12,1 1,89 ± 0,47
0,5 60,3 ± 32,3 2,21 ± 0,36
1 580,7 ± 43,1 2,47 ± 0,67
2 460,6 ± 53,2 3,27 ± 0,53
4 211,5 ± 25,6 3,58 ± 0,24
6 61,9 ± 13,2 3,89 ± 0,77
24 70,3 ± 20,1 2,73 ± 0,64
48 51,2 ± 9.1 2,43 ± 0,43

При однократном введении ретинола пальмитата достоверное повышение его уровня в крови выявляется через 1 ч. В это время максимальное его содержание равняется 580 мкг/100 мл крови. Через 2 и 4 ч концентрация ретинола пальмитата медленно снижается соответственно до 460 и 211 мкг/100 мл крови, а через 6 ч начинает приближаться к уровню, характерному для интактных животных.

После введения животным раствора a-токоферола ацетата повышение его концентрации обнаруживается к первому часу и составляет 2,47 мкг/100 мл крови. Далее наблюдается медленное увеличение его содержания до 3,89 мкг/100 мл крови к 6 ч наблюдения. Через 24 ч отмечается снижение концентрации витамина до 2,73 мкг/100 мл крови.

Используя полученные данные, с помощью одночастевой модели, описывающей внемодельное всасывание для ретинола пальмитата, и одночастевой модели, описывающей всасывание нулевого порядка для a-токоферола и его уксусного эфира, были рассчитаны основные фармакокинетические параметры, которые представлены в таблицах 3 и 4.

Расчеты показывают, что после перорального введения ретинола пальмитата в виде масляного раствора константа его элиминации составляет 0,0293 1/час, время выведения половины количества из кровяного русла - 23,7 ч. Полное всасывание осуществляется за 2 ч, а среднее время удерживания равняется 33,3 ч. Общий клиренс соответствует величине 12,2 мл/мин. Объем кажущегося распределения равен 25 л, а площадь под фармакологической кривой "концентрация-время" - 68,2 мкг/мл/час. Величина параметра - "концентрация-время" была принята нами за 100%.

Таблица 3. Основные параметры фармакокинетики ретинола пальмитата при различных способах введения.
Параметр Единица измерения Введение масл. р-ра per os Аппликация мази на кожу
Константа элиминации, Kel 1/час 0,0293 0,0316
Время полувыведения, T1/2 час 23,7 22,0
Время полного всасывания, Tвс. час 2,0 6,0
Среднее время удерживания, T час 33,3 29,9
Общий клиренс, Clt мл/мин 12,2 1,95
Объем распределения, V л 25,0 3,70
Площадь под кривой, AVC мкг/мл/час 68,2 214,0
Максимальная концентрация, Cmax мкг/мл 5,80 11,45
Время достижения Сmax, Tmax час 1,0 1,0
Относительная биодоступность % 100,0 313,78

При накожном применении мази Радевит® значение константы элиминации ретинола пальмитата, время его полувыведения и среднее время удержания соответственно равняются 0,0316 1/час, 22,0 ч и 29,9 ч, что эквивалентно абсолютным значениям этих величин при приеме per os масляного раствора. Отмечено значительное увеличение максимальной концентрации ретинола пальмитата в крови до 11,45 мкг/мл, времени полного всасывания до 6 ч, уменьшение объема кажущегося распределения до 3,70 л и общего клиренса до 1,95 мл/мин. Все это в конечном итоге привело к увеличению площади под фармакологической кривой до 214 мкг/мл/час и росту относительной биологической доступности ретинола пальмитата до 313,78 %.

Таким образом, совместное применение витаминов А, Е и D ведет к большему содержанию ретинола пальмитата в кровотоке и в 3-4 раза увеличивает его биодоступность для органов и тканей.

Всасывание a-токоферола ацетата в желудочно-кишечном тракте характеризуется следующими параметрами: время полного всасывания - 1,38 ч, максимальная концентрация - 34,1 мкг/мл, время достижения максимальной концентрации - 1,38 ч. При его выведении константа элиминации равняется 0,00567 1/час, удаление из кровяного русла половинного количества произойдет через 1,38 ч, среднее время удерживания составит 177 ч. Освобождение крови от a-токоферола идет со скоростью 26,7 мл/мин, объем кажущегося распределения соответствует величине 29,2 л, а площадь под кривой - 6047,0 мкг/мл/час. Относительная биодоступность a-токоферола при приеме внутрь была нами принята за 100%.

Аппликация мази, содержащей a-токоферол ацетат, ведет к сокращению времени полного всасывания до 0,926 ч, к снижению почти в 1000 раз максимальной концентрации (0,0423 мкг/мл), увеличению (почти в 4 раза) времени достижения максимальной концентрации, двукратному росту среднего времени удерживания. Установлено также падение константы элиминации до 0,00313 1/час и, соответственно, увеличение времени полувыведения до 221 ч. При этом выведение a-токоферола ацетата из крови ( 8,8 мл/мин ) идет медленнее и значительно (в 8 раз) возрастает объем распределения. Из анализа полученных данных очевидно, что оптимальным путем поступления витамина Е в организм является всасывание в желудочно-кишечном тракте. Кожа хуже пропускает a-токоферол ацетат в кровь. Однако, попав туда через кожу, a-токоферол ацетат более длительное время циркулирует в кровотоке.

Полученные данные позволяют дать некоторые рекомендации по применению мази Радевит®. В связи с тем, что клетки кожи пролиферируют и проходят стадию дифференцировки преимущественно в ранние утренние часы, аппликация мази на кожу должна быть проделана поздним вечером, перед сном. В этом случае пик максимальной концентрации ретинола пальмитата в крови придется на время активного деления клеток, когда они особо восприимчивы к этому витамину.

Таблица 4. Основные параметры фармакокинетики a-токоферола ацетата при различных способах введения.
Параметр Единица измерения Введение масл. р-ра per os Аппликация мази на кожу
Константа элиминации, Kel 1 / час 0,00567 0,00313
Время полувыведения, T1/2 час 122,0 221,0
Время полного всасывания, Tвс. час 1,38 0,926
Максимальная концентрация, Cmax мкг/мл 34,1 0,0423
Время достижения Cmax, Tmax час 1,38 4,13
Среднее время удерживания, T час 177,0 320,0
Общий клиренс, Clt мл/мин 26,7 12,2
Объем распределения, V л 29,2 233,0
Площадь под кривой, AVC мкг/мл/час 6047,0 13,7
Относительная биодоступность % 100,00 0,23

Выводы

  1. После однократной аппликации мази Радевит® в кровоток наиболее быстро и полно поступает ретинола пальмитат, незначительно повышается концентрация в крови a-токоферола ацетата, а содержание 25-оксивитамина D не изменяется.
  2. Относительная биодоступность витамина А при использовании мази в три раза выше, чем при приеме per os масляного раствора ретинола пальмитата.
  3. Оптимальным путем поступления витамина Е в организм является его всасывание в желудочно-кишечном тракте, однако поступление a-токоферола ацетата через кожу сопровождается изменением его фармакокинетики в сторону удлинения фазы выведения.
  4. Применение мази Радевит®, содержащей ретинола пальмитат, a-токоферола ацетат и эргокальциферол, целесообразно осуществлять вечером перед сном.

Ю.П. Архапчев, К.С. Гузев, В.И. Ноздрин

Задать вопрос врачу